ELISA試劑盒檢測中用到的樣品處理方法
瀏覽次數:6506發布日期:2013-08-21
hbzhan內容導讀:試劑盒使用時一定要根據自己的實驗需要購買提取試劑盒,如果不是試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質量以及完整性,會影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析、分子克隆等后續實驗的結果。
1.細胞培養物上清:
細胞培養物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應避免反復凍融。
2.血清:
標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后與1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3.血漿:
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
4.尿液:
無菌收集取初尿,離心除去沉淀物,既可用于檢測,要長期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
5.組織勻漿:
將組織標本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜,再經過二次反復凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。
當前提取效果好的是QIANGEN公司生產的RNA提取
試劑盒,但其售價較高,單次實驗費用話費太大,對精度要求不高的實驗沒有必要購買,當然還有其它的進口試劑盒,但是均存在價格高、訂貨周期長的問題(如果碰上國內無貨的時候,要從國外發貨,會等很長一段時間)。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以,價格不高,基本上各地均有現貨,如天根(目前國內生產的試劑盒中銷售面比較廣的一種)等,其價格比進口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯,性價比還可以。
當然,就RNA的提取而言,不一定
試劑盒的提取效果就非常好,其實采用一些經典的RNA提取方法,效果也很不錯,如:TRIZOL、EDTA等,只是試劑盒使用方便,經典的方法操作復雜一些。